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腸神經膠質細胞病理學形態改變和研究技術

來源:原創論文網 添加時間:2019-06-25

  摘    要: 腸神經膠質細胞 (enteric glial cells, EGCs) 是腸神經系統的重要組成部分, 其數量約是腸神經元數量的4倍.在形態和功能上與中樞神經系統的星形膠質細胞相似.在營養、支持腸神經、維持胃腸道穩態、調節胃腸道功能等方面發揮著重要作用.由于其在腸道中發揮的作用復雜而多樣, 成為研究的焦點.對其形態學的觀察和研究是非常重要的.EGCs發現至今, 針對其發揮功能的作用機制已得到深入研究, 相應的研究方法也在不斷的進步與改進中.本文主要介紹EGCs在胃腸道生理及病理狀態下形態學特點及目前形態學研究方法, 以期對未來研究EGCs提供實驗方法的借鑒及參考意義, 推進這一領域的發展.

  關鍵詞: 腸神經膠質細胞; 免疫組織化學; 電鏡技術; 全層鋪片技術;

  Abstract: As an important part of the intestinal nervous system, enteric glial cells are about four times as many as intestinal neurons.Furthermore, a large population of astrocyte-like glial cells populate gut muscle layers and the intestinal mucosa, and mounting new evidence points toward enteric glial cells as an active participant in gut pathology.They are similar in morphology and function to the astrocytes of the central nervous system and play an important role in nutrition, supporting gastrointestinal nerve, maintaining gastrointestinal homeostasis, and regulating gastrointestinal function.Because of their complex and diverse roles in the intestinal tract, they have become the focus of research.As the study of their functional mechanism has been extensively deepened, the research methods for intestinal glial cells are also on constant progress and improvement, especially in studying their morphology.This paper mainly introduces the morphological characteristics of enteric glial cells under the conditions of gastrointestinal physiology and pathology, so as to provide a reference for the future study of enteric glial cells and promote the development of this field.

  Keyword: Enteric glial cells; Immunohistochemistry; Electron microscopy; Whole mount stretch preparation;

  0、 引言

  D o g i e l在1899年首次觀察并描述了腸神經膠質細胞 (enteric glial cells, EGCs) [1].1972年Gabella[2]確定EGCs是一種獨特的神經膠質細胞, 不同于周圍神經系統的其它部分, 具有獨立的特征 (其胞體比腸神經元胞體小, 有許多突起, 在膠質細胞體和突起中有大量膠質絲) .

  1、 腸神經膠質細胞生理形態

  Rühl[3]以成年豚鼠回腸為研究對象, 在電子顯微鏡下觀察肌間神經叢內神經節發現此處有非常緊湊的結構, 周圍有基板, 與結締組織和血管分離.所有的間隙由腸神經和膠質元素占據, 形成致密的神經纖維網, 相鄰細胞膜之間有20 nm的間隙.EGCs在神經節和神經從連接處數量較多, 其細胞核數量是神經元細胞的2-3倍, 膠質細胞比神經元細胞小, 細長型, 胞體界限不清楚, 核橢圓形, 有深深的凹痕, 核外膜上附著大塊致密物質.其胞質中含有豐富的核糖體、內質網、細絲微管.膠質細絲很突出, 但其數量和密度是可變的.中心粒部分突出, 有時會有纖毛.線粒體呈橢圓形, 具有橫嵴和致密的嵴間基質.細胞核和線粒體的形態學特征為膠質細胞的鑒定提供了良好的標準.膠質細胞體大小、形狀不規則, 典型線粒體存在, 膠質細胞絲和微管的出現是膠質細胞識別的主要特征.

  Hanani等[4]運用膠質細胞穿刺灌注賴根過氧化物酶檢測, 研究發現膠質細胞的形態取決于它們在腸道中所處的位置和微環境狀態, 并且首次提出根據EGCs的形態學差異對膠質細胞群體提出分類:神經節內的膠質細胞與中樞神經星形膠質細胞相似呈星形, 擁有非常短的不規則的突起, 這種類型與中樞神經系統灰質內的原生質星形膠質細胞非常相似, 稱為“原生質”或Ⅰ型腸膠質細胞.神經節間纖維束內的膠質細胞類似于中樞神經纖維性星形膠質細胞, 與節間纖維束相平行性延長, 并且很少的分支, 稱為“纖維型”或“Ⅱ型腸膠質細胞”.
 

腸神經膠質細胞病理學形態改變和研究技術
 

  Bohórquez等[5]用掃描電鏡與共聚焦顯微鏡聯合觀察并鑒定腸道分泌細胞, 從三維角度研究其超微結構, 發現腸內分泌細胞的神經莢膜由EGCs護衛.觀察到在固有層內有腸膠質細胞, 并且所觀察EGCs形態的特征:長而薄的足突從細胞體和神經元纖維呈放射狀延伸;在平面細胞體內典型的細長核;這些突起在神經纖維周圍形成獨特的神經鞘.膠質細胞從固有層由上皮下基層纖維形成的基板的開窗進入上皮.膠質細胞突觸內含有可見的小的透明的分泌小泡, 類似于突觸末端, 而神經膠質源性神經營養因子可以促進腸內分泌細胞神經莢膜的發育.

  相關研究進一步發現EGCs在腸道內廣泛分布于腸道的黏膜層、黏膜下神經叢、肌間神經叢和肌層, 腸外也分布于胃黏膜固有層[6,7].EGCs在腸黏膜上皮與黏膜下層的腸神經系統之間形成網絡, 其一端與腸上皮緊密接觸, 另一端則緊密包繞腸神經, 從而將腸上皮細胞與腸神經系統聯系起來, 貫穿整個腸壁[8].免疫組化也顯示, 在小腸絨毛中, 膠質原纖維酸性蛋白 (glial fibrillary acidic protein, GFAP) 陽性的膠質細胞胞體和突觸緊鄰腸上皮, 延伸至絨毛頂端[9].EGCs網絡分為三層:與腸上皮細胞緊密相連的為第一層, 其足突與腸上皮細胞形成類似神經突觸樣的特殊結構;EGCs彼此之間形成第二層, 其通過足突形成的縫隙鏈接彼此相連;EGCs網絡延伸至黏膜深層, 密切包繞神經元及突觸間隙, 形成第三層[10].

  隨著研究不斷深入, 發現EGCs在腸道微環境中呈現不同的形態特征, 迄今為止分為四種形態類型:Ⅰ型或“原漿”和Ⅱ型或“纖維型”如前所述;Ⅲ型或“黏膜型”EGCs是上皮下的神經膠質細胞, 有幾個長分枝;Ⅵ型或“肌肉內”的EGCs是細長的膠質細胞運行在肌肉組織的神經纖維中[1,11,12].EGCs形態結構特征或許與其所處的微環境有關, 根據所處位置還可以分為黏膜神經膠質、神經節內神經膠質、肌內神經膠質, 而不同位置的膠質細胞具有不同的生理功能[1].

  2、 EGCs病理學形態改變

  一系列研究發現EGCs與胃腸道功能密切相關, 在不同的胃腸道病理狀態下其形態會發生不同改變.

  Fujikawa等[13]首次在腸易激綜合征 (irritable bowel syndrome, IBS) 中觀察到EGCs發生的形態學的改變 (即從絲狀到葉狀改變) , EGCs結構的變化可能反映了其膠質活性的改變.在IBS動物模型中免疫熒光觀察:大部分EGCs (GFAP免疫陽性) 分布于腸道神經元 (HuCD免疫陽性) 周圍, 正常組可見少量與神經元重疊的EGCs, 然而這些EGCs密度增生即與神經元重疊的EGCs增生密度在模型組 (壓力增加) 大鼠中逐漸增加.在不同壓力情況下, 膠質細胞根據其末端結構分為絲狀 (沒有明顯頸部或球狀末端腫脹) 和葉狀 (頸部有球狀末端腫脹區) .實驗組葉狀突起與每個神經節總突起的比值高于對照組, 在急性應激過去4 wk后, 上述結構發生逆轉.在應對應激反應中, 增生的EGCs (尤其是球狀腫脹) 表現與神經元顯著重疊[14].

  研究者應用免疫熒光染色觀察肌間神經叢發現, 正常條件下EGCs包繞在神經節周圍, 扁平外突清晰光滑, 連續延伸, 熒光度偏低;失血性休克后出現變形, 外突變得模糊, 有些出現中斷, 熒光度增強;電針足三里穴可以減輕失血性休克后EGCs的形態異常, 外突比模型組清晰光滑, 熒光度更強[15,16].在應用透射電鏡對IBS患者EGCs進行超微結構的觀察, 電鏡結果顯示IBS患者EGCs異染色質明顯減少 (此為轉錄激活的信號) , 線粒體數目明顯增多, 糖原顆粒明顯增多, 鏡下粗面內質網及多核糖體經肉眼觀察也多于對照組, 表明IBS患者存在EGCs功能異常活躍[17].

  應用HE染色觀察慢傳輸便秘結腸黏膜形態學改變, 發現對照組 (正常組) EGCs及其突起組成神經節, 細胞排列整齊均勻.模型組 (慢傳輸便秘) EGCs明顯減少尤其以黏膜下環肌層表面和環肌層區域更加突出, 神經纖維空泡樣變性且排列紊亂, 大部分模型動物結腸壁肌間神經叢和黏膜下神經叢的腸神經元數量較空白對照組明顯減少.電鏡觀察對照組可見EGCs核染色質分布均勻, 核膜清晰, 形態正常, 胞質內線粒體, 粗面內質網, 核糖體等細胞器結構清晰.模型組可見細胞核染色質聚集, 部分核固縮, 細胞質內線粒體腫脹, 粗面內質網擴張[18].

  采用消化道全層鋪片 (whole mount stretch preparation) 的方法研究缺血再灌注損傷時EGCs變化, 發現正常狀態下動物腸肌間神經叢EGCs縱橫交織呈網格狀包繞在腸神經節周圍, 與節間神經連接, 包繞軸突, 延伸出的扁平外突把神經元與神經節外細胞不完全隔離, 呈連續性分布, 形成了一個巨大的網絡結構;而在缺血再灌注后, 腸黏膜受到不同程度損傷, 肌間神經叢EGCs細胞也受到一定程度的受損, 鈣結合蛋白S100β陽性細胞數量明顯減少, 連續性條帶消失, 網格變得模糊[19].

  觀察EGCs在不同病理狀態下形態學的改變, 對于揭示其在腸道中發揮的作用具有很重要的意義, 提示EGCs在維護腸道屏障功能, 改善腸道炎癥等方面發揮著重要的作用.

  3、 EGCs形態學研究方法

  腸神經系統在神經胃腸病學中被稱為“腸腦”, 主要由腸神經元和EGCs組成, EGCs作為腸神經系統的重要組成部分, 引起廣泛關注[20].研究者從不同的角度運用不同的研究方法研究EGCs在胃腸道中發揮的作用.其中對EGCs形態學的研究主要運用HE染色、免疫組織化學 (immunohistochemistry, IHC) 、免疫細胞技術、透射電鏡技術等, 從大體觀到微觀結構觀察EGCs在生理和病理情況下的形態學改變.揭示了EGCs參與到胃腸道功能調節, 并且發揮著重要作用.

  3.1、 IHC技術

  IHC是生命科學, 尤其是現代病理學診斷、鑒別診斷、腫瘤特異性分子靶標篩選、鑒定的最重要技術手段之一, IHC技術于1941年Coons等[21]采用熒光素標記抗體檢測肺炎雙球菌研究時產生.隨著技術的不斷更新發展, 產生了酶標抗體技術、賴根過氧化物酶標記抗體過氧化物酶技術、ABC法, 快速ABC法、二步ABC法等等, 隨著抗原修復技術的出現, IHC技術的敏感性、特異性大幅度提高, 靶標的定位更為準確、背景愈加清晰.此外, 由于單克隆抗體技術的發展, IHC可檢測分子靶標譜和適用樣本范圍大幅度擴展, 越來越多的指標可采用IHC在冷凍切片、細胞爬片、細胞滴片和常規福爾馬林固定、石蠟包埋的組織樣本中檢出[22,23].研究發現, EGCs分泌膠質原纖維酸性蛋白GFAP、鈣結合蛋白S100β、Sox8/9/10等[11,24], 因此通常以GFAP或S100β免疫陽性作為EGCs標志物, 檢測其在胃腸標本中整體表達和分布情況, 并進行半定量分析.但研究發現, GFAP、S100β抗體在免疫組化染色模式下不能很好地區分單個細胞, 而且其在腸道組織中免疫反應不規則及片狀化, 不允許進行一定的定量IHC研究.Sox8/9/10免疫陽性完全局限于膠質細胞核, 能夠清楚明確地辨別單個細胞, 從而能夠較容易而可靠地實現對EGCs定量[25].在研究神經膠質細胞和腸神經元凋亡在難治性慢傳輸型便秘的神經病理學中的作用時, 研究者運用免疫組化染色發現與正常組相比, 慢傳輸型便秘患者腸內神經元和ICC細胞明顯減少, 但EGCs (S100標記) 減少的更加明顯, 可能進一步削弱本已不穩定的神經腸內平衡[26].為進一步了解EGCs在人類胃腸道疾病中的作用, 任何腸全層活檢的組織病理學研究不僅評估神經元, 而且應該查看腸神經膠質網絡的異常變化.

  3.2、 免疫熒光染色技術

  免疫熒光染色技術是將抗體或抗原在不影響其免疫學特性的條件下, 以化學方法同熒光素相結合, 然后將標記有熒光素的抗體 (或抗原) 作為試劑, 在特定的條件下與相應抗原 (或抗體) 進行反應, 再借助熒光顯微鏡觀察特異性免疫熒光現象的一種免疫標記技術免疫熒光技術特點:快速性、敏感性、廣泛適應性、定位性.缺點:不能對組織細胞進行細微結構的觀察, 不易鑒別細胞種類, 難以制備永久性標本, 熒光容易消退.免疫熒光染色特點是可在細胞水平上對特異性抗原或抗體定位的一種通用手段.其中多重免疫熒光染色技術利用抗原-抗體特異性結合的原理, 可對細胞中多種蛋白進行可視化定量、定性及共定位.間接免疫熒光技術, 一直以來同種來源的抗體染色會發生相互串色, 造成結果誤判, 而運用間接多重免疫熒光染色可避免這種情況.基于免疫過氧化物-免疫熒光序貫技術的圖像編輯系統, 該方法采用數字圖像編輯技術將兩個獨立采集的圖像合并為一個合并圖像, 采用間接免疫過氧化物酶, 然后依次進行間接免疫熒光、數字圖像采集和圖像編輯.可以實現在不同細胞中識別不同抗原以及在同一細胞中共定位抗原.與雙重免疫熒光相比, 能更好觀察組織形態結構, 很容易在同一個細胞中定位兩個不同抗原[27].

  通過免疫熒光技術標記GFAP來檢測EGCs, 結果顯示正常EGCs胞體內含有大量大小、形狀不同的突觸, 其圍繞著細胞核呈現清晰、連續、細長的形態, 分布在細胞體邊緣[28].在對功能性消化不良患者十二指腸活檢進行免疫熒光染色觀察發現正常組黏膜下神經叢內EGCs (S100標記) 包繞腸神經元 (HuCD免疫陽性) 并在神經節內形成清晰的網絡結構, 為腸神經提供網絡結構和功能支持.而功能性消化不良組黏膜下神經叢內腸神經元周圍膠質細胞反應性增生, 體積增大, 網絡結構紊亂, 單個細胞無法識別.此觀察結果是功能性消化不良疾病黏膜下神經叢腸神經功能和結構異常的直接證據, 可能對功能性消化不良具有預測和診斷的價值[29].

  3.3、 全層鋪片技術

  消化道全層鋪片即整裝撕片.根據消化道管壁內神經叢的結構特點, 分縱層肌、環層肌、黏膜下層等分層撕開鋪片, 以暴露不同的壁內神經叢, 是研究腸壁內神經形態和分布的有效實驗手段.可以直接暴露肌間神經叢, 能完整觀察神經叢的形體和結構, 另外, 神經元和神經纖維的數量較大, 可以提高神經叢上待測物質的陽性率[30,31].神經叢為扁平網狀結構, 使用全層鋪片技術與IHC染色相結合可以直觀、全面顯示所要觀察細胞的形態、整體結構或多細胞間的相互關系及位置變化.研究大鼠結腸肌間神經叢內EGCs時, 在體式顯微鏡下逐層剝離黏膜層、黏膜下層, 環形肌, 清楚顯示位于縱、環肌之間的肌間神經叢, 將組織撕片附于載玻片上, 獲得腸肌間神經叢全層鋪片標本.再與神經膠質細胞特異性標志物鈣結合蛋白S100β免疫熒光組織化學染色相結合, 可清晰顯示肌間神經叢EGCs的形態, 即從胞體發出的突起伸展填充在神經元胞體及其突起之間[32].全層鋪片技術可以很好補充冰凍切片或石蠟切片在實驗觀察中的不足.制備全層鋪片后再進行細胞學或免疫細胞化學染色, 能較好地顯示胃腸道環形肌、縱形肌、肌間神經叢及其周圍細胞的形態與結構, 便于觀察疾病時腸神經系統及其周圍細胞的形態結構與重塑[33].

  3.4、 電鏡技術

  透射電子顯微鏡 (transmission electron microscopy, TEM) 能夠在超微結構水平上觀察生物組織、細胞及細胞器的形態結構[34].透射電鏡技術在各組織超微結構病理學觀察中發揮著無可替代的作用, 它是以電子束為“光源”通過電磁透鏡成像的電子光學儀器, 放大倍數可達幾十萬倍[35].應用透射電鏡觀察EGCs的超微結構染色質、線粒體、內質網等細胞器結構, 是研究EGCs生理病理情況下超微結構變化最常用的方法.但透射電鏡對樣本制作及儀器的操作要求極高, 其中透射電鏡制樣過程中樣本超微結構的保存受多種因素的影響[36].

  另外掃描電子顯微鏡可以將特定細胞的精細超微結構在三位空間中被揭示出來, 使細胞和組織的超微結構在三維中以常規和自動化的方式呈現.掃描電子顯微鏡在神經科學中已經非常流行, 它有助于揭示神經回路的特定突觸連接.用掃描電鏡觀察到在固有層內腸膠質細胞, 以三維視角可看到更為清晰的特征: (1) 長而薄的足突從細胞體和神經元纖維呈放射狀延伸; (2) 在平面細胞體內典型的細長核; (3) 這些突起在神經纖維周圍形成獨特的神經鞘.膠質細胞從固有層由上皮下基層纖維形成的基板的開窗進入上皮.膠質細胞突觸內含有可見的小的透明的分泌小泡, 類似于突觸末端[5].

  4、 結論

  EGCs形態學的研究是對其進行鑒別以及分子特征和功能特征研究的前提, 也是充分了解EGCs在胃腸道功能和疾病中發揮作用的前提, 有效的形態學研究方法尤為重要.EGCs的形態取決于它們在胃腸道中所處的位置和微環境狀態, 在病理狀態下還可以發生表型改變和重塑, 以應對營養、機械、疾病相關的損傷.大量研究已經揭示了EGCs在胃腸道中不僅僅局限于營養、支持腸神經, 還參與胃腸道穩態、腸道黏膜屏障、胃腸道運動、胃腸道免疫等功能的調節.對于未來的研究更多傾向于研究EGCs起作用的復雜的分子信號機制.集中于研究EGCs與腸上皮細胞、腸神經元、腸道免疫細胞、腸道分泌細胞相互之間作用機制, 影響調節腸道的許多功能, 如運動、分泌、屏障功能.采用有效的研究方法, 從形態學角度揭示EGCs及與鄰近細胞形態學變化將對其作用機制的研究有很大的提示作用.此外, 運用有效的形態學研究方法觀察病理狀態下EGCs數量及形態結構的改變對于臨床診斷和評估胃腸道疾病具有重要的意義.除了傳統的免疫熒光、電鏡等技術外, 較前沿的基因嵌合分析與免疫染色雙標相結合等方法, 對EGCs進行高分辨率的形態學表征的研究, 擴展了先前關于EGCs形態學的研究.技術不斷發展, 那么更精準的形態學研究方法有待于進一步探索.

  參考文獻

  [1] Gulbransen BD, Sharkey KA.Novel functional roles for enteric glia in the gastrointestinal tract.Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2012;9:625-632[PMID:22890111 DOI:10.1038/nrgastro.2012.138]
  [2] Gabella G.Fine structure of the myenteric plexus in the guineapig ileum.J Anat 1972;111:69-97[PMID:4335909]
  [3] Rühl A.Glial cells in the gut.Neurogastroenterol Motil 2005;17:777-790[PMID:16336493DOI:10.1111/j.1365-2982.2005.00687.x]
  [4] Hanani M, Reichenbach A.Morphology of horseradish peroxidase (HRP) -injected glial cells in the myenteric plexus of the guinea-pig.Cell Tissue Res 1994;278:153-160[PMID:7954696 DOI:10.1007/bf00305787]
  [5] Bohórquez DV, Samsa LA, Roholt A, Medicetty S, Chandra R, Liddle RA.An enteroendocrine cell-enteric glia connection revealed by 3D electron microscopy.PLo S One 2014;9:e89881[PMID:24587096 DOI:10.1371/journal.pone.0089881]
  [6] De Giorgio R, Giancola F, Boschetti E, Abdo H, Lardeux B, Neunlist M.Enteric glia and neuroprotection:basic and clinical aspects.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2012;303:G887-G893[PMID:22878122 DOI:10.1152/ajpgi.00096.2012]
  [7] Coelho-Aguiar Jde M, Bon-Frauches AC, Gomes AL, Veríssimo CP, Aguiar DP, Matias D, Thomasi BB, Gomes AS, Brito GA, Moura-Neto V.The enteric glia:identity and functions.Glia2015;63:921-935[PMID:25703790 DOI:10.1002/glia.22795]
  [8] Liu YA, Chung YC, Pan ST, Shen MY, Hou YC, Peng SJ, Pasricha PJ, Tang SC.3-D imaging, illustration, and quantitation of enteric glial network in transparent human colon mucosa.Neurogastroenterol Motil 2013;25:e324-e338[PMID:23495930 DOI:10.1111/nmo.12115]
  [9] Savidge TC, Sofroniew MV, Neunlist M.Starring roles for astroglia in barrier pathologies of gut and brain.Lab Invest 2007;87:731-736[PMID:17607301 DOI:10.1038/labinvest.3700600]
  [10] Neunlist M, Van Landeghem L, MahéMM, Derkinderen P, des Varannes SB, Rolli-Derkinderen M.The digestive neuronalglial-epithelial unit:a new actor in gut health and disease.Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2013;10:90-100[PMID:23165236 DOI:10.1038/nrgastro.2012.221]
  [11] Boesmans W, Lasrado R, Vanden Berghe P, Pachnis V.Heterogeneity and phenotypic plasticity of glial cells in the mammalian enteric nervous system.Glia 2015;63:229-241[PMID:25161129 DOI:10.1002/glia.22746]
  [12] Sharkey KA.Emerging roles for enteric glia in gastrointestinal disorders.J Clin Invest 2015;125:918-925[PMID:25689252DOI:10.1172/JCI76303]
  [13] Fujikawa Y, Tominaga K, Tanaka F, Tanigawa T, Watanabe T, Fujiwara Y, Arakawa T.Enteric glial cells are associated with stress-induced colonic hyper-contraction in maternally separated rats.Neurogastroenterol Motil 2015;27:1010-1023[PMID:25960044 DOI:10.1111/nmo.12577]
  [14] Grubi?i?V, Gulbransen BD.Enteric glia:the most alimentary of all glia.J Physiol 2017;595:557-570[PMID:27106597 DOI:10.1113/JP271021]
  [15] 趙增凱.電針足三里對失血性休克大鼠腸屏障和腸膠質細胞保護作用的研究.2015;15:136-139[DOI:10.3969/j.issn.1672-8521.2014.03.002]
  [16] Hu S, Zhao ZK, Liu R, Wang HB, Gu CY, Luo HM, Wang H, Du MH, Lv Y, Shi X.Electroacupuncture activates enteric glial cells and protects the gut barrier in hemorrhaged rats.World J Gastroenterol 2015;21:1468-1478[PMID:25663766 DOI:10.3748/wjg.v21.i5.1468]
  [17]王鵬.腸易激綜合征腸上皮-腸膠質細胞網絡調控異常的分子機制研究.山東大學, 2015
  [18]劉麗莎, 張微, 趙敏, 毛廷麗, 李思宇, 李瑛, 鐘振東.針刺大腸俞募穴對慢傳輸便秘小鼠結腸組織形態學的影響.中華中醫藥雜志2016;31:255-258
  [19] Mendes CE, Palombit K, Vieira C, Silva I, Correia-de-SáP, Castelucci P.The Effect of Ischemia and Reperfusion on Enteric Glial Cells and Contractile Activity in the Ileum.Dig Dis Sci 2015;60:2677-2689[PMID:25917048 DOI:10.1007/s10620-015-3663-3]
  [20] Bassotti G, Villanacci V, Antonelli E, Morelli A, Salerni B.Enteric glial cells:new players in gastrointestinal motility.Lab Invest 2007;87:628-632[PMID:17483847 DOI:10.1038/labinvest.3700564]
  [21] Coons AH.The development of immunohistochemistry.Ann N Y Acad Sci 1971;177:5-9[PMID:44005566 DOI:10.1111/j.17496632.1971.tb35025.x]
  [22] Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F, Facchetti F, Dei Tos AP.Rabbit monoclonal antibodies:a comparative study between a novel category of immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal antibodies.Am J Clin Pathol 2005;124:295-302[PMID:16040303DOI:10.1309/NR8H-N08G-DPVE-MU08]
  [23] Ward JM, Rehg JE.Rodent immunohistochemistry:pitfalls and troubleshooting.Vet Pathol 2014;51:88-101[PMID:24078006DOI:10.1177/0300985813503571]
  [24] Cirillo C, Sarnelli G, Esposito G, Turco F, Steardo L, Cuomo R.S100B protein in the gut:the evidence for enteroglialsustained intestinal inflammation.World J Gastroenterol 2011;17:1261-1266[PMID:21455324 DOI:10.3748/wjg.v17.i10.1261]
  [25] Hoff S, Zeller F, von Weyhern CW, Wegner M, Schemann M, Michel K, Rühl A.Quantitative assessment of glial cells in the human and guinea pig enteric nervous system with an antiSox8/9/10 antibody.J Comp Neurol 2008;509:356-371[PMID:18512230 DOI:10.1002/cne.21769]
  [26] Bassotti G, Villanacci V, Maurer CA, Fisogni S, Di Fabio F, Cadei M, Morelli A, Panagiotis T, Cathomas G, Salerni B.The role of glial cells and apoptosis of enteric neurones in the neuropathology of intractable slow transit constipation.Gut2006;55:41-46[PMID:16041063 DOI:10.1136/gut.2005.073197]
  [27]楊敏, 田志華, 馬博, 賈凱英, 張鴻麗, 富晶, 綦雯雯, 趙威.多重間接免疫熒光技術的建立及其在肝癌樣本多種抗原檢測中的應用.細胞與分子免疫學雜志2018;34:97-104[DOI:10.13423/j.cnki.cjcmi.008522]
  [28] Le Berre-Scoul C, Chevalier J, Oleynikova E, Cossais F, Talon S, Neunlist M, Boudin H.A novel enteric neuron-glia coculture system reveals the role of glia in neuronal development.JPhysiol 2017;595:583-598[PMID:27436013 DOI:10.1113/JP271989]
  [29] Cirillo C, Bessissow T, Desmet AS, Vanheel H, Tack J, Vanden Berghe P.Evidence for neuronal and structural changes in submucous ganglia of patients with functional dyspepsia.Am J Gastroenterol 2015;110:1205-1215[PMID:26077177 DOI:10.1038/ajg.2015.158]
  [30]白艷華, 張軍.大鼠胃腸道肌間神經叢鋪片的制備和染色法的研究.第四軍醫大學學報2009;30:1950-1952
  [31] Pearson GT.Structural organization and neuropeptide distributions in the equine enteric nervous system:an immunohistochemical study using whole-mount preparations from the small intestine.Cell Tissue Res 1994;276:523-534[PMID:7520362 DOI:10.1007/bf00343949
  [32]紀托, 薛紅, 朱進霞.顯示腸肌間神經叢的全層鋪片技術.首都醫科大學學報2009;30:256-258[DOI:10.3969/j.issn.1006-7795.2009.02.031]
  [33]張國權, 孫海梅, 夏白娟, 李小雙, 康倩, 江濤.全層鋪片技術研究消化道神經叢和Cajal間質細胞.解剖學研2013;35:76-78[DOI:10.3969/j.issn.167-0770.2013.01.022]
  [34]周德山.電鏡技術在醫學生物學領域應用體會及歷史回顧.中國解剖學會.解剖學雜志-中國解剖學會2002年年會文摘匯編.中國解剖學會2002;2
  [35] Mitchison HM, Shoemark A.Motile cilia defects in diseases other than primary ciliary dyskinesia:The contemporary diagnostic and research role for transmission electron microscopy.Ultrastruct Pathol 2017;41:415-427[PMID:28925789 DOI:10.1080/01913123.2017.1370050]
  [36]王萌, 李婷, 董紅燕.透射電鏡制樣過程中漂洗時間對神經組織超微結構的影響.神經解剖學雜志2018;34:515-518[DOI:10.16557/j.cnki.1000-7547.2018.04.017]

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